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PMSF蛋白酶抑制劑使用中的常見問題
Release Time：2022-10-01一、PMSF的作用：
實驗中常用到的PMSF功能主要是絲氨酸蛋白酶抑制劑，苯甲基磺酰氟（PMSF）通常用于制備細胞裂解液，有助于保存樣品。作為一種非特異性抑制劑，PMSF通常用于保護樣品免受蛋白酶（如胰蛋白酶、糜蛋白酶和凝血酶）以及其他酶的消化功能的影響。PMSF也用于制備從細胞和組織中提取的蛋白質提取物。通過使含有這種氨基酸的任何酶的絲氨酸羥基失活，PMSF可以防止感興趣的蛋白質降解?；谄涠贪胨テ冢仨氃诿總€凈化步驟中添加該抑制劑。
二、PMSF的應用：
※ 通常用于蛋白質溶解，在細胞裂解后使特定蛋白質失活；
※ 絲氨酸蛋白酶抑制劑；
※ FAAH抑制劑；
三、PMSF化學數(shù)據
PMSF化學結構：
化學分子式：C7H7FO2S
CAS編號：329-98-6
分子量：174.2 Da
外觀：白色細針/結晶粉末
純度：99%
由BIOFOUNT公司提供的PMSF。
四、PMSF 使用過程常見問題解答
1.PMSF在水中會發(fā)生什么現(xiàn)象？
苯基甲基磺酰氟的溶解度有限，在水溶液中極不穩(wěn)定。應在使用前立即將其添加到緩沖區(qū)中。苯甲基磺酰氟水溶液在pH值為8時的半衰期約為30分鐘。
2. PMSF有危險嗎？
苯基甲基磺?；锸且环N細胞毒性化學物質，只能在通風柜或經認證的生物實驗臺中使用。
3. 有沒有無毒的替代品？
AEBSF（4-[2-氨基乙基]-苯磺酰氟化物、鹽酸鹽或Pefabloc）是一種無毒替代品。它是一種不可逆的絲氨酸蛋白酶抑制劑，使用濃度與PMSF相同，但在水緩沖溶液中無毒且穩(wěn)定。
4. 如何制定PMSF實驗方案？
儲備溶液通常用無水乙醇、異丙醇或二甲基亞砜配制。苯基甲基磺酰氟也可溶于乙醚、苯、（無水2-丙醇（200 mM）、無水甲醇（200 mC）和無水乙醇（200 mT）。在0.1至1 mM最終濃度的大多數(shù)蛋白質溶液中有效。以17.4 mg/mL（100 mM）的速度將PMSF溶于異丙醇中，并在-20°C下保存在等分溶液中。
a.稱出17.4mg PMSF抑制劑
b.加入異丙醇至10ml，溶解。
c.無需過濾或消毒。
d.等分并儲存于20°C。
5. PMSF產品是否需要特殊處理？
※ 苯基甲基磺酰氟具有細胞毒性和吸濕性，應避光保護。
※ 如果增加pH值和溫度，這種抑制劑會發(fā)生什么變化？
※ 失活率隨著pH值的增加而增加，并且在25°C時比在4°C時更快。
6.這種抑制劑的半衰期是多少？
※ 20 mM PMSF水溶液在pH 8.0下的半衰期約為35 min。
※ 該產品的GHS分類是什么？
H301分類急性毒性3（口服），皮膚H314，腐蝕性1B，眼部損傷H318 1。
7. 苯甲基磺酰氟的結合位點是什么？
抑制劑與絲氨酸蛋白酶中的活性位點絲氨酸殘基特異性結合，但不與蛋白質中的任何其他絲氨酸殘體結合。
8. PMSF能用于X射線晶體學嗎？
該抑制劑與活性絲氨酸殘基處的酶共價結合，可通過X射線結晶學觀察到該酶；因此，該抑制劑可以作為一種化學標記來識別酶中的必需活性位點絲氨酸。
