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凍干培養(yǎng)細(xì)菌的方法
Release Time：2022-10-161. 凍干簡(jiǎn)介：
冷凍干燥，也稱為凍干或冷凍干燥，是在產(chǎn)品冷凍后除去水分并將其置于真空中的過(guò)程。這使得冰可以從固體變?yōu)檎羝?，而無(wú)需經(jīng)過(guò)液相。冰（或其他冷凍溶劑）通過(guò)升華過(guò)程從產(chǎn)品中可以去除，是結(jié)合水分子通過(guò)解吸過(guò)程去除。※ 常用細(xì)菌培養(yǎng)基：肉湯培養(yǎng)基和普通瓊脂培養(yǎng)基，LB培養(yǎng)液，TSB培養(yǎng)液，TSA培養(yǎng)基等，F(xiàn)T培養(yǎng)液，TSC培養(yǎng)基，麥康凱培養(yǎng)基，血瓊脂平板。
2. 什么情況下適合冷凍干燥
長(zhǎng)期保存細(xì)菌、真菌、酵母或其他微生物培養(yǎng)物的最佳方法之一是使用冷凍干燥過(guò)程。這一簡(jiǎn)短的實(shí)驗(yàn)室程序可以與任何商用冷凍干燥器一起進(jìn)行，以保存培養(yǎng)物收集。
因?yàn)槔鋬龈稍锸亲顝?fù)雜和最昂貴的干燥形式，所以該過(guò)程通常僅限于價(jià)值較高的細(xì)膩、熱敏材料。未被冷凍損壞的物質(zhì)通?？梢詢龈?，因此無(wú)需冷藏。
凍干的過(guò)程可能只需要三個(gè)小時(shí)，也可能需要24小時(shí)（不包括培養(yǎng)物生長(zhǎng)時(shí)間）。
3. 實(shí)驗(yàn)所需儀器
※ 冷凍干燥機(jī)
※ 高壓滅菌器
※ 營(yíng)養(yǎng)素或其他合適的瓊脂平板
※ 培育培養(yǎng)物的孵化器
※ 玻璃棒
※ 凍干緩沖液
※ 用橡皮塞壓接頂部小瓶（用壓接器壓接瓶蓋）
4. 凍干及存儲(chǔ)過(guò)程需要的試劑
※ 常用凍干保護(hù)劑：10%脫脂奶粉，5%蔗糖，1%明膠，溶于純水中
※ 凍干保護(hù)劑的作用：凍干保護(hù)劑是在在凍結(jié)和干燥過(guò)程中，可以防止活性組分發(fā)生變性。
※ 填充劑：能防止有效組分隨水蒸汽一起升華逸散，并使有效組分成形。
※ 抗氧化劑：用作防止生物制品在冷凍干操過(guò)程以及儲(chǔ)藏過(guò)程中發(fā)生氧化變質(zhì)。
※ 酸堿調(diào)整劑：在冷凍干澡過(guò)程和儲(chǔ)藏過(guò)程中，能將生物制品的pH調(diào)整到活性物質(zhì)的最穩(wěn)定區(qū)域。
5. 凍干的步驟
a. 所有凍干培養(yǎng)基、保護(hù)劑以及容器等均需高溫高壓滅菌。高壓滅菌前，在試管內(nèi)貼上印有培養(yǎng)物標(biāo)識(shí)的紙標(biāo)簽。或者，使用帶無(wú)菌帽的試管；
b. 取一環(huán)分離后所得到的細(xì)菌菌液或者是甘油保存的菌液，在細(xì)菌培養(yǎng)板上分區(qū)或者使用蛇形劃板（大腸桿菌在麥康凱平板上劃板），37℃倒置培養(yǎng)并過(guò)夜；
c. 取一只干凈并且進(jìn)行高溫高壓滅菌后的試管，倒入大約10ml的細(xì)菌培養(yǎng)液（大腸桿菌用磅培養(yǎng)液），從過(guò)夜培養(yǎng)后的培養(yǎng)平板中取一個(gè)單菌落至該培養(yǎng)液中后，在37℃溫度條件下振蕩培養(yǎng)過(guò)夜；
d. 取10支清洗干凈且進(jìn)行滅菌處理后的西林瓶，每個(gè)西林瓶中加入 1ml的凍干保護(hù)劑，后加入過(guò)夜培養(yǎng)后的1ml 菌液，蓋上無(wú)菌橡膠塞，備注：需要保留出氣孔，并做好標(biāo)記后，存放于-80℃冰箱冷凍存儲(chǔ)；
e. 細(xì)菌凍干機(jī)預(yù)熱約30分鐘后，迅速將已冷凍的菌液放在細(xì)菌凍干機(jī)上，打印幾小時(shí)至十幾小時(shí)不等細(xì)菌已凍干。
f. 凍干后關(guān)閉凍干機(jī)，取出已經(jīng)凍干好的細(xì)菌，壓蓋密封，存儲(chǔ)在 -80℃條件下超低溫冰箱保存，可存放數(shù)年。
