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BODIPY TR 神經(jīng)酰胺 熒光圖

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BODIPY TR 神經(jīng)酰胺 活細胞染色方案:
一、BODIPY TR 神經(jīng)酰胺 工作液的配制
1. 第一次使用本品，可將 BODIPY TR 神經(jīng)酰胺 (0.5mM)根據(jù)單次用量分裝，比如10µl/管。本品一管含30µl（總量：1mg），由于本身量微少，務必低速離心后再開蓋，然后用低吸附槍頭吸取母液，并分裝-20℃凍存，避免反復凍融。
2. 吸取少量 BODIPY TR 神經(jīng)酰胺 (0.5mM)按照1：100的比例用Golgi-Tracker稀釋液來稀釋，比如：取10µl BODIPY TR 神經(jīng)酰胺 (0.5mM)加入到1ml Golgi-Tracker稀釋液中，混勻后即為BODIPY TR 神經(jīng)酰胺工作液，工作液請現(xiàn)配現(xiàn)用。

※ 【注意事項】：BODIPY TR 神經(jīng)酰胺 的工作濃度可以根據(jù)實際情況進行適當調(diào)整，推薦的稀釋比例調(diào)整范圍為1:50~1:200。

二、活細胞高爾基體的熒光標記
1. 去除細胞培養(yǎng)液，用適量的溶液如Hanks平衡鹽溶液（含鈣鎂）或其他緩沖液來洗滌生長在蓋玻片上的細胞。
2. 去除洗滌液，加入新鮮配制的 BODIPY TR 神經(jīng)酰胺 染色工作液，4℃孵育30min。
3. 吸走染色液，用冰浴預冷的細胞培養(yǎng)液洗滌細胞3次左右，換新鮮培養(yǎng)液37℃再孵育30min。
4. 用新鮮培養(yǎng)液再洗滌一次，隨后用熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡進行觀察。此時可觀察到高爾基體呈明亮的強熒光染色，而細胞內(nèi)的其他膜系統(tǒng)呈比較微弱的熒光染色。

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BODIPY TR 神經(jīng)酰胺--熒光細胞成像

BODIPY TR Ceramide 應用于小鼠原代脾細胞 48 小時。染料直接添加到介質(zhì)中，應用染料后 2 小時、8 小時、14 小時、24 小時和 48 小時拍攝圖像。
圖像使用了偽紅色（可參見其他圖像以了解通常橙色）

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實驗注意事項：
1. 避光保存，避免反復凍融，可根據(jù)單次用量分裝保存。避免將本品儲存于無霜冰箱；
2. BODIPY TR 神經(jīng)酰胺 (1mM)在4℃條件下、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi)，使用前可以20-25℃水浴片1-5分鐘至全融解后使用。對于微量的液體，使用前需要離心數(shù)秒鐘后，使液體充分沉降到管底；
3. 本產(chǎn)品僅供科學研究使用！

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