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BODIPY TR 神經(jīng)酰胺 熒光圖

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BODIPY TR 神經(jīng)酰胺 活細(xì)胞染色方案:
一、BODIPY TR 神經(jīng)酰胺 工作液的配制
1. 第一次使用本品，可將 BODIPY TR 神經(jīng)酰胺 (0.5mM)根據(jù)單次用量分裝，比如10µl/管。本品一管含30µl（總量：1mg），由于本身量微少，務(wù)必低速離心后再開(kāi)蓋，然后用低吸附槍頭吸取母液，并分裝-20℃凍存，避免反復(fù)凍融。
2. 吸取少量 BODIPY TR 神經(jīng)酰胺 (0.5mM)按照1：100的比例用Golgi-Tracker稀釋液來(lái)稀釋?zhuān)热纾喝?0µl BODIPY TR 神經(jīng)酰胺 (0.5mM)加入到1ml Golgi-Tracker稀釋液中，混勻后即為BODIPY TR 神經(jīng)酰胺工作液，工作液請(qǐng)現(xiàn)配現(xiàn)用。

※ 【注意事項(xiàng)】：BODIPY TR 神經(jīng)酰胺 的工作濃度可以根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，推薦的稀釋比例調(diào)整范圍為1:50~1:200。

二、活細(xì)胞高爾基體的熒光標(biāo)記
1. 去除細(xì)胞培養(yǎng)液，用適量的溶液如Hanks平衡鹽溶液（含鈣鎂）或其他緩沖液來(lái)洗滌生長(zhǎng)在蓋玻片上的細(xì)胞。
2. 去除洗滌液，加入新鮮配制的 BODIPY TR 神經(jīng)酰胺 染色工作液，4℃孵育30min。
3. 吸走染色液，用冰浴預(yù)冷的細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞3次左右，換新鮮培養(yǎng)液37℃再孵育30min。
4. 用新鮮培養(yǎng)液再洗滌一次，隨后用熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡進(jìn)行觀(guān)察。此時(shí)可觀(guān)察到高爾基體呈明亮的強(qiáng)熒光染色，而細(xì)胞內(nèi)的其他膜系統(tǒng)呈比較微弱的熒光染色。

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BODIPY TR 神經(jīng)酰胺--熒光細(xì)胞成像

BODIPY TR Ceramide 應(yīng)用于小鼠原代脾細(xì)胞 48 小時(shí)。染料直接添加到介質(zhì)中，應(yīng)用染料后 2 小時(shí)、8 小時(shí)、14 小時(shí)、24 小時(shí)和 48 小時(shí)拍攝圖像。
圖像使用了偽紅色（可參見(jiàn)其他圖像以了解通常橙色）

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實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1. 避光保存，避免反復(fù)凍融，可根據(jù)單次用量分裝保存。避免將本品儲(chǔ)存于無(wú)霜冰箱；
2. BODIPY TR 神經(jīng)酰胺 (1mM)在4℃條件下、冰浴等較低溫度情況下會(huì)凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi)，使用前可以20-25℃水浴片1-5分鐘至全融解后使用。對(duì)于微量的液體，使用前需要離心數(shù)秒鐘后，使液體充分沉降到管底；
3. 本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！

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