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熒光染料使用指南
Release Time：2022-09-19熒光染料的介紹：
熒光還在生物技術(shù)和生命科學(xué)領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用。 事實(shí)上，熒光染料已廣泛用于流式細(xì)胞術(shù)、免疫熒光、蛋白質(zhì)印跡和 DNA 電泳等眾多應(yīng)用中。 這些染料有多重要，您如何選擇最適合您應(yīng)用的染料？ 以下是您需要了解的一些事項(xiàng)，以幫助您做出正確的決定。
熒光染料：了解基礎(chǔ)知識(shí)
熒光染料到底是什么，它們是如何工作的？ 基本上，熒光染料是天然或合成化合物，它們吸收光或電磁能并以光子的形式以較低能量（即較長(zhǎng)波長(zhǎng)）重新發(fā)射。
選擇熒光染料時(shí)要考慮那些因素：
※ 激發(fā)波長(zhǎng)處的消光系數(shù)應(yīng)盡可能高：消光系數(shù)是衡量可以吸收多少光子的量度。
※ 量子產(chǎn)率應(yīng)該盡可能高：這是吸收光子與發(fā)射光子的比率。消光系數(shù)和量子產(chǎn)率的乘積就是亮度。
※ 熒光染料應(yīng)該是光穩(wěn)定的：遺憾的是，比較不同公司染料的光穩(wěn)定性的研究并不多。
※ 光致變色行為：對(duì)于 STORM 實(shí)驗(yàn)，您需要一個(gè)閃爍的熒光團(tuán)。但是，對(duì)于分子跟蹤實(shí)驗(yàn)，您絕對(duì)不想要閃爍的熒光團(tuán)。
※ 活/死細(xì)胞滲透性。
※ 您想要的反應(yīng)側(cè)基（例如 HaloTag、抗體等）。
※ 當(dāng)您使用多個(gè)熒光探針時(shí)，尤其是當(dāng)您量化共定位時(shí)，請(qǐng)謹(jǐn)慎處理其他顏色通道中的滲色。單獨(dú)測(cè)試所有熒光探針以評(píng)估滲透。
盡管可用于實(shí)驗(yàn)室的熒光團(tuán)數(shù)量眾多，但這些染料通常屬于以下三組之一：
※ 熒光染料: 這些是用于在體外標(biāo)記生物相關(guān)分子的小型有機(jī)天然或合成熒光分子。該組中的一些熒光染料包括熒光素、溴化乙錠和花青。
※ 熒光蛋白: 這些是較大的、生物制造的蛋白質(zhì)，由于它們的大分子結(jié)構(gòu)而發(fā)出熒光。 GFP、RFP 和 YFP 是屬于該組的一些染料。
※ 量子點(diǎn): 這些高熒光合成納米晶體由半導(dǎo)體材料制成。
隨著熒光基本特性的廣泛應(yīng)用和該領(lǐng)域的顯著進(jìn)步，已經(jīng)針對(duì)特定應(yīng)用和儀器開(kāi)發(fā)和優(yōu)化了數(shù)百種活性熒光染料。 同樣，多年來(lái)，大量復(fù)雜的熒光技術(shù)（例如，F(xiàn)RET、TRF、FP、FRAP、FACS、FCS）也在不斷發(fā)展。
為什么要使用熒光染料？
雖然不同的染色技術(shù)（即考馬斯染色、銀染色、熒光染色）可用于可視化凝膠電泳分離的蛋白質(zhì)，但使用熒光染料具有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。 他們提供：
※ 高靈敏度：對(duì)于大多數(shù)分析物，熒光測(cè)量的靈敏度比吸光度測(cè)量高 1000 倍，即使在使用小樣本時(shí)也可以令人滿意地達(dá)到 ppt（萬(wàn)億分之一）的檢測(cè)限。
寬線性動(dòng)態(tài)范圍。 輸出與樣品濃度成正比。
※ 低干擾：由于吸收光的材料數(shù)量眾多，分光光度測(cè)量通常會(huì)遇到干擾問(wèn)題。 在進(jìn)行熒光測(cè)量時(shí)不會(huì)遇到這個(gè)問(wèn)題，因?yàn)橹挥猩贁?shù)材料具有熒光能力。
※ 高通量：熒光測(cè)量具有簡(jiǎn)單而強(qiáng)大的協(xié)議，并且可以自動(dòng)化用于高通量應(yīng)用。
如何選擇的染料？
考慮到熒光染料種類(lèi)繁多，您如何為您的特定應(yīng)用選擇使用哪種染料？ 以下是您需要考慮的一些因素。
※ 與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的兼容性：雖然它們可能與其他熒光團(tuán)共享一些光譜相似性，但每種染料都是獨(dú)一無(wú)二的，并且具有不同的功能、激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)、波段形狀和寬度以及光穩(wěn)定性。為確保成功，請(qǐng)選擇與您的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)相輔相成的一種。
※ 與設(shè)備的兼容性：選擇與您正在使用的照明源相匹配的染料。在選擇合適的熒光儀器時(shí)，請(qǐng)考慮儀器的靈敏度、動(dòng)態(tài)范圍、穩(wěn)定性和通量、信噪比和信空白比。為了獲得更好的結(jié)果，請(qǐng)確保染料的發(fā)射曲線與可用的檢測(cè)方法相匹配。
※ 與樣品中其他熒光材料的相容性：在雙重或三重標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中，您選擇的染料的發(fā)射和激發(fā)曲線不應(yīng)與其他熒光團(tuán)重疊。由于許多天然存在的細(xì)胞成分會(huì)以與您選擇的染料或探針相同的波長(zhǎng)發(fā)出熒光，因此您還需要確?？梢詮谋尘白园l(fā)熒光中清楚地識(shí)別所選染料產(chǎn)生的信號(hào)。
