DNA純化與RNA純化有什么區(qū)別?
Release Time:2022-09-20DNA純化和RNA純化有什么區(qū)別?
了解 DNA 和 RNA 的具體作用是大多數(shù)分子生物學(xué)、基因組學(xué)、生物技術(shù)和流行病學(xué)研究中的一個重要因素。 但是,您需要高質(zhì)量的 DNA 和 RNA 樣本才能滿足您的實(shí)驗(yàn)和后續(xù)下游應(yīng)用的要求,因?yàn)槭褂檬芪廴镜臉颖緹o法為您提供準(zhǔn)確的生物學(xué)相關(guān)結(jié)果。 這就是 DNA 和 RNA 純化的用武之地。
那么,DNA純化和RNA純化的主要區(qū)別是什么?
DNA純化
DNA 可以從各種材料中制備,包括血液、脫落的膀胱細(xì)胞、冷凍組織樣本和石蠟組織塊。由于 DNA 在合適的儲存條件下通常是穩(wěn)定的,因此可以分批制備和儲存。
DNA 提取和純化涉及三個基本步驟——打開細(xì)胞以暴露 DNA,通過使用適當(dāng)?shù)娜ノ蹌┤コぶ?,以及用酒精沉?DNA。還有兩個可選步驟幾乎總是在沉淀步驟之前完成 - 通過添加適當(dāng)?shù)牡鞍酌溉コ鞍踪|(zhì)和使用 RNase 去除 RNA。
通過樣品的 DNA 純化,您可以最大限度地減少非目標(biāo) DNA 和其他污染物的干擾,并提高樣品在長期儲存中的穩(wěn)定性。
RNA純化
另一方面,RNA 提取和純化涉及四個基本步驟。首先,您需要通過向樣品中加入硫氰酸胍和還原劑來破壞細(xì)胞,然后對其進(jìn)行劇烈搖晃或渦旋。此步驟還將破壞二硫鍵并使樣品中存在的污染蛋白質(zhì)失活。
細(xì)胞裂解后,您需要添加苯酚和氯仿-異戊醇以從溶液中分離您的 RNA 樣品。水相含有珍貴的 RNA,因此您需要將其放入單獨(dú)的試管中,加入異丙醇并離心溶液以沉淀 RNA。然后用 75% 乙醇洗滌沉淀物,然后去除樣品中的任何雜質(zhì)。
然而,重要的是要注意 RNA 與 DNA 相比不太穩(wěn)定,因此您應(yīng)該只在使用前對其進(jìn)行分離。在處理之前、期間和之后還應(yīng)特別小心,以確保樣品的純度。請記住,即使是最少量的 RNase 也會影響其質(zhì)量。
DNA 和 RNA 也可以通過提取總核酸部分并將其分成兩部分從同一生物樣品中分離出來——其中一部分將用 DNase 1 處理,而另一部分將用 RNase A 處理以回收 RNA 和DNA,分別。