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PMSF（苯甲基磺酰氟）
Release Time：2022-09-30PMSF（苯甲基磺酰氟）簡(jiǎn)介：
※ PMSF（苯甲基磺酰氟）是一種不可逆的絲氨酸蛋白酶抑制劑，用于各種研究和實(shí)驗(yàn)室過程中。PMSF在室溫下呈白色粉末狀外觀，
※ PMSF熔點(diǎn)：在 90-95°C 之間。它通過抑制絲氨酸蛋白酶（如胰蛋白酶、糜蛋白酶和凝血酶）和半胱氨酸蛋白酶（如木瓜蛋白酶）發(fā)揮作用。該過程涉及通過酯化使活性位點(diǎn)上含有絲氨酸的酶失活。
了解 PMSF
※ PMSF（苯甲基磺酰氟）是一種不可逆的絲氨酸蛋白酶抑制劑，它通過抑制絲氨酸蛋白酶（如胰蛋白酶、糜蛋白酶和凝血酶）和半胱氨酸蛋白酶（如木瓜蛋白酶）發(fā)揮作用。該過程涉及通過酯化使活性位點(diǎn)上含有絲氨酸的酶失活。絲氨酸蛋白酶天然存在于所有生物體中，并負(fù)責(zé)廣泛的生物過程。例如，胰蛋白酶和彈性蛋白酶充當(dāng)胰腺消化酶，而溶纖蛋白影響細(xì)胞轉(zhuǎn)化。
※ PMSF 等化合物可以通過防止蛋白酶的酶促功能幫助研究人員保存實(shí)驗(yàn)室的純細(xì)胞樣本。這種抑制劑的溶解度有限，需要研究人員在使用前將化合物溶解在乙醇、甲醇或異丙醇等溶劑中。因此，它可以作為水溶性蛋白酶抑制劑如 AEBSF（4-苯磺酰氟鹽酸鹽）的替代品。由于其半衰期短（通常僅在細(xì)胞裂解和純化的第一步之間持續(xù)），研究人員可能會(huì)考慮應(yīng)用其他蛋白酶抑制劑來延長(zhǎng)酶的生物活性以滿足他們的研究需要。
PMSF常見應(yīng)用
1. 細(xì)胞裂解物的制備
裂解是一個(gè)涉及細(xì)胞膜分解的過程，可以促進(jìn)對(duì)細(xì)胞成分的詳細(xì)研究。裂解的結(jié)果稱為裂解物。研究人員研究了 PMSF 作為酶活性的誘導(dǎo)劑，以刺激真菌物種（Daedaleopsis confragosa 和 D. tricolor）對(duì)木材降解（櫻桃木屑）的刺激。該研究表明，在木質(zhì)素分解酶的情況下，PMSF 在裂解制劑中的重要作用。 PMSF 可以幫助研究人員準(zhǔn)確地制備細(xì)胞裂解物，確保酶促反應(yīng)不會(huì)通過裂解物緩沖液相互作用而損害靶蛋白。例如，科學(xué)家經(jīng)常將 PMSF 添加到裂解緩沖液中，以從大腸桿菌中制備細(xì)胞裂解液。研究人員將 PMSF 應(yīng)用于 Sofalcone 的研究，Sofalcone 是一種合成查爾酮，用作胃粘液的保護(hù)劑。該團(tuán)隊(duì)將 PMSF 包括在裂解液緩沖液、組織提取物、組織裂解物和組織核提取物的制備中。 PMSF 的使用使研究人員發(fā)現(xiàn)了該藥物與 KEAP1 蛋白結(jié)合的功能，從而產(chǎn)生抗結(jié)腸炎作用。
2. 樣品保存
PMSF 用于在裂解后使特定蛋白質(zhì)失活，以提供溶解的研究樣品。這種抑制劑的非特異性使研究人員能夠?qū)⒃摶衔飸?yīng)用于各種研究。例如，科學(xué)家們使用 PMSF 濃度來研究 anandamide 在模擬大麻活動(dòng)小鼠模型中的作用。研究人員發(fā)現(xiàn) PMSF 阻斷了大麻中的主要精神成分 anandamide 的代謝功能。 PMSF 為研究人員提供了訪問目標(biāo)化合物的途徑。在另一個(gè)例子中，研究人員研究了導(dǎo)致保存的海水樣本中細(xì)菌流失的因素。通過將 PMSF 添加到戊二醛（實(shí)驗(yàn)中使用的防腐劑）中，科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)在 30-35 天內(nèi)減少了細(xì)菌的損失。該實(shí)驗(yàn)支持 PMSF 在保存戊二醛保存樣品中的細(xì)菌方面的作用。
3. 蛋白質(zhì)純化
生物蛋白質(zhì)的細(xì)胞水平在其自然狀態(tài)或溫和的環(huán)境條件下是穩(wěn)定的。體外研究和實(shí)驗(yàn)將破壞蛋白質(zhì)的細(xì)胞力學(xué)，導(dǎo)致降解和變性。蛋白酶抑制劑（如 PMSF）將通過減輕酶促反應(yīng)在研究期間保持蛋白質(zhì)穩(wěn)定或純化。具體而言，在裂解過程中，細(xì)胞/細(xì)胞器可能會(huì)面臨通常抑制蛋白酶反應(yīng)的調(diào)節(jié)機(jī)制的破壞。該反應(yīng)通過蛋白水解導(dǎo)致各種蛋白質(zhì)的分解。結(jié)果，研究人員可能會(huì)在該過程中丟失感興趣的蛋白質(zhì)，這會(huì)影響他們發(fā)現(xiàn)的準(zhǔn)確性。研究人員通常將 PMSF 和 AEBSF 應(yīng)用于蛋白質(zhì)純化過程，因?yàn)榧?xì)胞和組織中的大多數(shù)蛋白酶屬于絲氨酸蛋白酶組。因此，PMSF 是基于絲氨酸實(shí)驗(yàn)的裂解緩沖液中的重要組成部分。 PMSF 的加入減少了由于酶反應(yīng)引起的樣品污染，并為研究人員提供了更高濃度的功能性蛋白質(zhì)。
采購(gòu)優(yōu)質(zhì)試劑和化合物
研究人員可以將 PMSF 添加到抑制劑混合物或蛋白酶抑制劑混合物中，為裂解物樣品提供全面的保護(hù)，使其免受所有四種催化蛋白酶的酶促作用：絲氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸和金屬。
PMSF 案例:
PMSF-sensitive conversion of AR to resorufin occurs in the mitochondrial matrix. (a) Confocal images of isolated liver mitochondria (average intensity projections of 10 Â 0.1 μM confocal planes captured at 1 Airy unit) showing resorufin and Mitotracker Green fluorescence. Resorufin fluorescence can be seen throughout the mitochondria matrix. Scale bar is 5 mM. (b) Mean line profile intensities of resorufin (RR) fluorescence through the central plane image of intact mitochondria after normalising both intensity (maxima ¼1) and size (edges and centre defined to set all objects to an equal, arbitrary diameter). N ¼ 13. Full width half maximum of the resorufin distribution is smaller than that of Mitotracker Green (MTG, p o 0.001, paired t test). (c) Western blots of mitochondrial subfraction marker proteins. AIF, apoptosis inducing factor; NDUFA9, NADH dehydrogenase 1 alpha subcomplex 9 (a component of complex I in the inner membrane); GDH, glutamate dehydrogenase. (d) Representative traces of resorufin fluorescence following incubation of the indicated liver mitochondrial subfraction with AR in the absence of HRP or substrate. All reactions are PMSF sensitive. (e) Resorufin fluorescence measured after incubation of intact liver mitochondria with AR for 10 min. Fluorescence (no PMSF, no further AR) was measured from intact mitochondria (ARþ mt) and after removing the outer membrane and intermembrane space (ARþ shaved mtp). Controls were mitochondria incubated without AR (mt) and blanks. Data are mean 7 SD, n¼ 3. (f) Representative traces of resorufin fluorescence in assay medium containing AR-pre-incubated liver (red circle) or brain (blue circle) mitochondria as only source of AR. Liver mitochondria were pre-treated (red diamonds) or not (red circle) with PMSF. 50mM AR without mitochondria was used as positive control. 49 pmole H 2 O 2 were added at the indicated time point. (g) Quantification of the experiment in f. Data are mean7 SD, n¼ 4. All values are significantly above 0 (Po 0.05, t-test). (For interpretation of the references to colour in this figure legend, the reader is referred to the web version of this article.)
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※ PMSF蛋白酶抑制劑使用中的常見問題
